Бак посев или пцр! Выявляет ли давнешние инфекции пцр анализ?

Могут ли анализы на половые инфекции ошибаться

К сожалению, такие ситуации вполне возможны, причем старые методы – микроскопическое исследование мазка, бакпосевы – ошибаются гораздо чаще современных ПЦР и ИФА. Но и при применении новых методик могут быть единичные ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Причины этого явления – неправильная подготовка к сдаче и погрешности при проведении анализа.

Причины ошибок при микроскопическом исследовании мазка

Этот анализ на ЗППП проводится довольно просто – берется мазок из половых путей, который окрашивается и осматривается. Метод был достаточно информативным много лет назад, когда выявлялись инфекции, вызываемые микробами и простейшими.

Однако со временем количество венерических инфекций увеличилось, и теперь они вызываются не только микробами, но и вирусами, определить которые с помощью мазка невозможно. Поэтому герпес, папилломавирус и  цитомегаловирус такой анализ не покажет.

Однако и традиционные инфекции в мазках выявляются далеко не всегда. Например, если мужчина помочится перед обследованием, он смоет всех возбудителей из мочеиспускательного канала, и в мазке их не будет. Такая же ситуация произойдет, если женщина перед сдачей анализов проспринцуется. Ложноотрицательный результат регистрируется и на фоне приема антибиотиков.

Чтобы добиться более достоверных результатов при сдаче мазков, используется метод провокации. Для этого перед анализом с вечера нужно выпить небольшое количество алкоголя, поесть копченой или солёной пищи. Иногда делаются специальные провоцирующие уколы. Как правило, после этого возбудители регистрируются лучше.

Чем обусловлены неправильные результаты бакпосева

Ложноотрицательные результаты в этом случае также получаются при приёме антибиотиков, местном использовании антибактериальных средств и неправильном взятии материала. Некоторые виды возбудителей просто не дают роста.

Ложноположительный результат может регистрироваться при попадании микробов в образец извне – например, при погрешности в проведении анализа.

Ошибки при проведении ИФА-обследования

И при этом обследовании тоже бывают ошибки. Чаще всего их причинами являются:

• неправильный забор материала;
• нарушение обмена веществ у пациентов;
• приём медикаментов, влияющих на работу иммунной системы;
• иммунодефицит;
• беременность, при которой также меняется работа иммунной системы. Поэтому при положительных результатах обследования назначают другие методы, подтверждающие или опровергающие диагноз.

ПЦР-диагностика – ошибки практически исключены

Самый достоверный метод лабораторных обследований, вычисляющий возбудителей даже по небольшому количеству материала, – ПЦР. Но иногда и он дает ошибки, если, например, забор образцов был проведен неправильно.

Порой возбудители не обнаруживаются, поскольку их просто нет в выделениях, а они находятся в более глубоких тканях, например внутри простаты у мужчин или в яичниках и матке у женщин. В этом случае делается мазок с провокацией. Если в качестве образца используется кровь, провоцирование не проводится. В результате точность обследования при проведении ПЦР-реакции доходит до 100%.

Точность лабораторной диагностики также зависит от применяемого оборудования и реактивов. Поэтому сдавая анализы в современной клинике или диагностическом центре, пациенты значительно уменьшают вероятность ложноположительного или ложноотрицательного результата.

Обследоваться на половые инфекции можно в клинике «Радуга», сотрудничающей с лабораторной сетью Invitro. Применяемые современная аппаратура и передовые технологии позволяют снизить вероятность неправильных результатов при определении ЗППП до минимума.

Что такое бактериурия и когда она возникает

Бактериурией называется наличие бактерий в урине. Часто это состояние не вызывает клинических симптомов, проявляясь случайно при сдаче анализов мочи. Присутствие микроорганизмов в мочевыводящих путях всегда говорит о серьезном воспалительном или инфекционном процессе.

Причины бактериурии

• Инфекции, в том числе ЗППП. В этом случае в урине обнаруживаются бактерии, попавшие из мочевого пузыря и уретры.
• Односторонний или двухсторонний пиелонефрит – инфекционное поражение почек.
• Острые и хронические воспалительные заболевания женской половой сферы. При этих патологиях микробы проникают в мочеполовую систему с током лимфы или крови.
• Камни, возникающие при мочекаменной болезни, затрудняющие отток урины и провоцирующие застойные явления в мочеполовой системе.
• Гломерулонефрит – в этом случае поражается гломерулярный фильтр и бактерии попадают с током крови в мочу.
• Новообразования предстательной железы, мешающие оттоку мочи и провоцирующие размножение бактериальной флоры.
• Прямокишечные свищи, при которых в мочу проникают микроорганизмы из кишечника.

Типы бактериурии

• Бессимптомная, при которой, кроме появления микроорганизмов в урине, ничего не беспокоит.
• Истинная – сопровождается затрудненным болезненным мочеиспусканием. Урина вытекает мутная, с хлопьями, гноем, иногда примесью крови. Наблюдается повышение температуры, боль в пояснице, озноб. У мужчин может наблюдаться выделение гноя из уретры.
• Восходящая – бактерии проникают из нижних отделов мочевыводящих путей в верхние. Часто наблюдается при ЗППП.
• Нисходящая – в этом типе бактериурии микробы проходят из почек вниз по мочеточникам, попадая в мочевой пузырь и уретру. Такая ситуация возникает при пиелонефрите и закупорке мочевых путей камнем.

Какие микроорганизмы чаще всего обнаруживаются в моче

Стрептококки появляются в анализах урины после перенесенных ангины, бронхита, пневмонии, скарлатины. В мочевыводящую систему они чаще всего проникают с током крови. Состояние обычно провоцируется низким иммунитетом.

Кишечная палочка проникает в мочевыделительную систему при несоблюдении правил гигиены и кишечных свищах. Колибациллярная бактериурия часто регистрируется при снижении защитных сил организма, вызванных диабетом и иммунными нарушениями.

Гонококк – при гонорее в моче обнаруживаются гонококки. Если заболевание перешло в хроническую форму, симптомы инфекции могут отсутствовать.

Брюшнотифозные сальмонеллы – при брюшном тифе в 30% случаев у больных наблюдается бессимптомное выделение микробов с мочой. Это состояние может сохраняться и после выздоровления.

Бактерии бруцеллеза – у 10% больных наблюдается выделение этого микроба с мочой. При этой инфекции часто наблюдается бессимптомная форма бактериурии.

Как проводится лечение

При регистрации микроорганизмов в моче делается ее посев с определением типа микроорганизмов и их чувствительности к антибиотикам.

Выясняются причины бактериурии. Пациентам назначается УЗИ почек, предстательной железы, малого таза, показывающее состояние этих органов. Дается направление на биохимический и общий анализы крови.

Назначается трехстаканная проба мочи. Урина собирается в три стакана и по повышенному количеству лейкоцитов в одной из проб судят о месте, где возникла инфекция:

• в первой пробе – поражён мочеиспускательный канал;
• в третьей – причина кроется в предстательной железе;
• во всех трёх – инфекция находится в почках;
• в первой и третьей – возможен простатит и уретрит, а также сочетание двух заболеваний.

Пациенты сдают анализы на половые инфекции – мазки из половых путей и предстательной железы, бакпосев, ПЦР, ИФА.

Делается ПСА-тест – анализ на рак предстательной железы. Этот маркер появляется в самом начале заболевания, поэтому выявлять злокачественные опухоли можно до начала клинических симптомов.

Для лечения назначаются антибиотики, противовоспалительные препараты, обезболивающие средства, инстилляции (введение антисептических растворов в уретру через мочевой пузырь). При обнаружении свищевых ходов показано хирургическое лечение.

Бактериурия – опасный симптом, говорящий о возможных тяжелых заболеваниях. Поэтому при появлении бактерий в моче нужно обратиться к урологу, обследоваться и вылечить выявленные патологии.

О враче

Запишитесь на прием к врачу урологу-андрологу высшей категории — Клокову Андрею Николаевичу уже сегодня. Мы сделаем все, чтобы принять вас как можно быстрее. Клиника Радуга расположена в Выборгском районе Санкт-Петербурга, всего в нескольких минутах ходьбы от станций метро Озерки, Проспект Просвещения и Парнас. Смотрите карту проезда.

Комплексное консервативное лечение ЗППП

от 18000

Назначение схемы лечения при ЗППП

1500 Вернуться к списку статей

ПЦР: какие болезни помогает выявить и на чем основывается

› ЗППП

18.02.2020

Зачастую пациенты при обследовании у уролога, гинеколога, венеролога и врачей других специальностей получают направление на ПЦР. Что это такое, знают немногие. Разберемся, на чем основывается этот анализ, при каких заболеваниях назначается и как его сдать правильно, чтобы получить достоверный результат.

Что такое ПЦР метод

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — диагностический метод, который позволяет обнаружить в человеческом организме ДНК возбудителей заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП). Эта методика также применяется для установления отцовства, выявления наследственных патологий. Ее используют для экспериментов при клонировании и для определения новых генов.

Анализ ПЦР основывается на взятие различных жидкостей из организма в качестве биологического материала. Он позволяет увеличить количество ДНК на одном участке в 2 раза при помощи специальных ферментов. Благодаря этому удается получить больше информации для подтверждения присутствия патогенного микроорганизма в биоматериале. Это позволяет обнаружить даже скрытое заболевание.

У пациентов часто диагностируют ИППП методом ПЦР. Зачастую инфекции, передаваемые половым путем, протекают без выраженной симптоматики.

Их возбудителей сложно выявить при помощи других исследований, т.к. они обладают низкой чувствительностью к патогенам. А ПЦР способна определить ДНК микробов в единичном количестве.

Это невозможно сделать, например, при микроскопии и бактериологическом посеве.

Показания к назначению ПЦР на ЗППП

ПЦР на ИППП назначается при возникновении симптоматики венерических заболеваний:

• зуд и жжение в гениталиях;
• проблемы с мочевыведением;
• подозрительные выделения;
• покраснение влагалища у женщин или полового члена у мужчин;
• сыпь на гениталиях;
• разрастание эпителия в шейке матки;
• эрозии на половых слизистых;
• воспаления в мочеполовой системе;
• изменение цвета спермы при подозрении на ИППП у мужчин;
• увеличение лимфоузлов в паху;
• сбои в менструальном цикле;
• выкидыши, патологии беременности, проблемы с зачатием;
• киста яичников;
• спайки в органах малого таза;
• боли внизу живота;
• простатит у представителей мужского пола.

Вне зависимости от того проявлялись ли перечисленные симптомы, обследование методом ПЦР на ИППП (инфекция, передающаяся половым путем) должны периодически проходить люди, которые ведут беспорядочную половую жизнь, а также женщины при планировании беременности и во время вынашивания плода. Как правило, врач выдает направление на ПЦР, когда уже сданы анализы ОАК и ОАМ, соскоб из уретры и цервикального канала для ИФА, микроскопии или бактериологии., но возбудителей определить не удалось.

Какие инфекции диагностируют методом ПЦР

Диагностика ИППП ПЦР позволяет обнаружить:

• Хламидиоз и уреаплазмы. Первое заболевание провоцируют хламидии. Они ведут жизнедеятельность в уретре, кишечнике, шейке матки. Без должного лечения приводят к бесплодию. Второй возбудитель вызывает уреаплазмоз. Чаще всего эта болезнь протекает бессимптомно и становится причиной выкидышей.
• ВИЧ, сифилис и нейросифилис. Последнее заболевание по симптоматике схоже с менингитом.
• Герпес (простой ВПГ 1 и 2 тип).
• Токсоплазмоз и краснуху.
• Инфекционный мононуклеоз (ДНК вируса Эпштейн-Барр-ВЭБ).
• Микоплазмоз. Мужчины чаще всего являются только носителями инфекции.
• Трихомониаз. У представителей мужского пола чаще всего протекает бессимптомно или проявляется только жжение при походах в туалет «по-маленькому». У женщин зачастую бывает обнаружено сопутствующее заболевание — трихомонадный кольпит.
• Кандидоз (молочница).
• ВПЧ штаммы 16 и 18 (вирус папилломы человека). Есть в организме практически у каждого человека. Большинство штаммов не представляют угрозы, но есть и такие, которые могут привести к онкологии.
• Цитомегаловирус. Обычно не провоцирует выраженную клиническую картину. Протекает в форме обычного ОРВИ.
• Гонорея. Провоцирует желтовато-белые выделения с неприятным запахом.
• Гарднереллез (бактериальный вагиноз). Клиническая картина схожа с молочницей.
• Туберкулез, листериоз, хеликобактерную инфекцию.
• Боррелиоз, клещевой энцефалит.

Как стало понятно, ПЦР анализ способен обнаружить возбудителей не только венерических заболеваний. Поэтому для постановки точного диагноза эту методику используют специалисты разных областей: урологи, гематологи, фтизиатры, гинекологи, гастроэнтерологи, онкологи, инфекционисты, венерологи.

Преимущества и недостатки ПЦР диагностики

ПЦР анализ на ИППП обладает такими преимуществами:

Высокая чувствительность и точность показаний. Если в биоматериале присутствует ДНК возбудителя даже в единичном количестве, диагностика его обнаружит.Быстрое получение результатов.На ПЦР можно производить любой забор биологического материала.Специфичность 100%.

Во время исследования обнаруживают специфичный фрагмент ДНК, принадлежащий определенному патогену.Доступность метода. Для проведения диагностики не нужно специального дорогостоящего оборудования, поэтому ее делают во многих клиниках.Достаточно взять биоматериал один раз, чтобы обнаружить инфекцию.

вероятность ложного результата (хотя такое бывает крайне редко, но все-таки риск есть)если микроорганизмы мутируют, то обследование не выявит их ДНК (такое бывает крайне редко);чтобы обнаружить скрытые инфекции (например, трихомониаз или хламидиоз), бывает необходима стимуляция;процедура достаточно дорогостоящая (500-2000 руб.).

Достоинств у ПЦР диагностики ИППП значительно больше, поэтому ее очень часто используют в медицинской практике.

Как подготовиться к ПЦР исследованию на ЗППП

Перед диагностикой ИППП к ПЦР нужно подготовиться:

• Обследование крови должно совершаться натощак. Запрещены и напитки, кроме небольшого количества питьевой воды.
• За сутки нельзя пить алкоголь, курить, нужно снизить физические нагрузки и избегать стрессовых ситуаций.
• За 2-3 дня до диагностики ИППП методом ПЦР отказаться от жареных и жирных блюд.
• За 1-2 суток при сдаче мочи отказаться от интимной близости. Биологический материал собирать сразу после пробуждения.
• При сдаче семенной жидкости за 4 дня не переохлаждать и не перегревать организм. За 2 суток не заниматься сексом.
• Женщинам рекомендуется сдавать мазок ПЦР в последний день менструального цикла, когда еще есть незначительные выделения. Не вступать в половой контакт за 2 суток, не проводить гигиену гениталий за 3 часа.
• При диагностировании сыпи берется соскоб. Перед ним за несколько дней нельзя использовать препараты местного назначения.
• Не принимать антибиотики за 2-4 недели до сдачи мочи и другого биологического материала. Если отменить лекарства невозможно, сообщить об этом медицинскому работнику.
• Накануне вечером перед сдачей анализа на ЗППП ПЦР гигиену половых органов осуществлять только водой, без использования гигиенических средств.

Выполнение этих правил необходимо для достоверного диагноза. Если точного результата нет, через сколько сдавать анализ повторно, решает врач.

Расшифровка результатов обследования

Такой анализ как ПЦР мочи и другого биологического материала бывает двух типов:

• Качественным. Результаты в листке с анализом могут иметь отрицательное и положительное значение. В первом случае возбудитель не найден, а во втором обнаружен.
• Количественным. Определяет число определенных патогенов. Значение 8х105МЕ/мл указывает на острую форму болезни, а 4х105МЕ/мл на процесс выздоровления.

Более точную расшифровку может дать только специалист.

Сдача ПЦР анализов после окончания антибиотикотерапии

После того, как пациент пролечился от заболевания, ему необходимо сдать контрольный анализ. Однако антибиотикотерапия может негативно отразиться на ПЦР.

Дело в том, что частицы уже погибших патогенов еще некоторое время находятся в организме. ПЦР не сможет определить их жизнеспособность и даст ложный результат.

Поэтому перед тем, как сдавать анализы, после прохождения курса лечения должно пройти минимум 4 недели.

Как часто сдавать ПЦР анализ на ЗППП, если ничего не беспокоит

При возникновении симптоматики заболеваний, которые диагностирует ПЦР, нужно сразу же сдать данный анализ. Также диагностика показана женщинам во время беременности, людям, которые имели за последние полгода двух и более половых партнеров. Анализ назначается и через месяц после окончания лечения ИППП, чтобы убедиться, что все патогены погибли.

Заключение

ПЦР диагностика является предпочтительной при подозрении на ЗППП. Она позволяет не только выявить ДНК возбудителя, но и определить его количество. Благодаря этому врач сможет подобрать наиболее эффективную методику терапии, а значит, удастся избежать опасных осложнений.

ПЦР: какие болезни помогает выявить и на чем основывается Ссылка на основную публикацию

Зачем может потребоваться сдача крови на ПЦР

Надежный, быстрый и высокочувствительный метод диагностики, способный идентифицировать возбудителей различных инфекционных заболеваний, выявляя их генетический материал (ДНК или РНК) в пробах, полученных от обследуемого пациента, называется полимеразной цепной реакцией (ПЦР).

Анализ ПЦР (полимеразной цепной реакции) был впервые разработан американцем Кэри Мюллисом в 1983-м году. Методика была сразу же запатентована компанией «Цетус Корпорейшн».

В 1992-м патент был продан компании «Хоффман-Ля Рош», но в итоге оказалось, что многие ученые из разных стран вели одновременно работу в этом направлении, внесли свой вклад в разработку новой технологии выявления возбудителей инфекционных заболеваний.

В свое время многими учеными метод ПЦР был назван «революционным» прорывом для вирусологов и инфекционистов, дав возможность получить результат анализа за считанные часы, а не ожидая информации днями и неделями, как это требовалось ранее.

Суть метода ПЦР

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в многократном увеличении самых ничтожных концентраций фрагментов ДНК в любой пробе. Для этого:

1. В специальный реактор помещается небольшое количество биологического материала в пробирке (слюна, кровь, моча, выделения из половых органов), в котором могут находиться фрагменты ДНК микроорганизма.
2. К этому материалу добавляются специальные ферменты, которые связываются с ДНК микроорганизма, синтезируя ее копию.
3. Реакция копирования ДНК проходит по принципу цепной реакции, в несколько этапов:
   • из 1 молекулы ДНК образуются 2 новые молекулы;
   • второй этап — из имеющихся 2 молекул образуются 4 новые;
   • после ряда циклов, вместо 1 копии ДНК, готовы для исследования несколько сотен/тысяч копий.

Преимущества ПЦР перед иными способами диагностики

К явным преимуществам, которые демонстрирует анализ ПЦР на ИППП, надо отнести точность и избирательность полученных результатов, поскольку реактив при ПЦР подходит к ДНК инфекции в точности, как ключ к замку — на каждый возбудитель заболевания имеется свой реактив. Тот же бакпосев признается не менее чувствительным методом, известным уже давно, отработанным до мелочей, пусть и более хлопотным. Однако по срокам выполнения посев заметно проигрывает молекулярным методам диагностики.

Даже тот факт, что для каждого возбудителя нужна своя питательная среда, а для хламидий, к примеру, она очень дорогая, нельзя рассматривать как решающий фактор, определивший распространенность анализа, в то как от пациента требуется лишь сдать соскоб из уретры на ПЦР.

Как оказалось, существующее отличие ИФА от ПЦР не дает возможность признать иммуноферментный метод лучшим, поскольку те же самые хламидии вызывают ответную реакцию иммунной системы человека в виде выработки антител IgA,IgM,IgG, а последнии сохраняются в крови в течение года после полного излечения, что и обуславливает неоднозначные, на первый взгляд, результаты лабораторных исследований — ИФА положительный ПЦР отрицательный (антитела имеются, а ДНК микроорганизма нет, т.к. пациент уже излечен).

К тому же, ослабленная сильными инфекциями иммунная система может с запозданием начать вырабатывать определяемые ИФА антитела либо вообще их не вырабатывать. В этом случае результаты анализа звучат следующим образом — ИФА отрицательный ПЦР положительный, что свидетельствует о начале заболевания, хоть и нет еще клинико-лабораторных его проявлений.

Пациентам предлагается сдать кровь на ПЦР, поскольку данный метод имеет следующие преимущества перед существующими технологиями определения скрытых до поры инфекций:

1. Высокая чувствительность метода. Имея всего несколько молекул ДНК микроорганизма, специалисты лаборатории, проводя анализ ПЦР, определяют наличие инфекции, что крайне важно при диагностировании хронических, латентно протекающих патологий. В ряде случаев, когда микроорганизм является некультивируемым иными способами, подобный анализ является единственным объективным методом выявления возбудителя.
2. Для качественного и быстрого исследования подходит любой биологический материал (слюна, кровь, волосы, выделения из половых органов, клетки эпителия).
3. Автоматизированный процесс позволяет получить результаты исследования спустя 4-5 часов. Существует даже наиболее современный метод ПЦР real time, когда визуальная оценка результатов ПЦР, для чего применялся метод электрофореза, сменяется флуоресцентными методами детекции продуктов амплификации. В результате применения модифицированного метода анализа — получение и интерпретация результатов анализа становится проще, быстрее, да и надежнее.
4. Несмотря на универсальность метода, на его основе разрабатываются и более специализированные технологии, благодаря чему при исследовании урогенитального тракта женщин опытный врач не задумывается о том, какое лабораторное обследование назначить — фемофлор или ПЦР. Именно фемофлор, базирующийся на использовании полимеразной цепной реакции, признается лучшим методом, благодаря которому ПЦР диагностика урогенитальных инфекций дает точную качественную и количественную картину условно-патогенной и нормальной картины женского урогенитального тракта в режиме «реального времени».
5. Врач получает возможность определить несколько видов возбудителей при сдаче пациентом лишь 1 пробы материала для анализа. Это ускоряет процесс диагностики заболевания, кардинально снижает материальные затраты на лабораторные исследования.
6. Количественный анализ ПЦР также признается важным фактором, определяющим достоинства проведения диагностики скрытого заболевания с помощью метода полимеразной цепной реакции — для оценки эффективности лечения многих хронических инфекций.

В противном случае, на конечной фазе насыщения, когда полученных в результате ПЦР копий становится слишком много, ограничивающими звеньями реакции становятся как субстраты (дезоксирибонуклеозидтрифосфаты), так и сам фермент.

Ведь для его молекул становится слишком много матричной ДНК в виде продуктов полимеразной цепной реакции.

В этих условиях завершение очередного этапа ПЦР уже не сопровождается удвоением количества копий ДНК/РНК, но происходит нивелирование небольших количественных отличий между ранними и поздними пробами, хоть на начальных этапах ПЦР достаточно четко выявляются различия.

Ведь для количественного определения микроорганизмов требуются даже праймеры либо дезоксирибонуклеозидтрифосфаты, меченные флуоресцентной или даже радиоактивной меткой.

Требования к оснащению и поддержанию санитарно-гигиенического режима в ПЦР-лабораториях не уступают хирургической операционной. ПЦР-лабораторию, в соответствии с «Методическими указаниями МУ 1.3.1888-04» оборудуют водопроводом, канализацией, электричеством и отоплением.

Все помещения ПЦР-лаборатории обеспечивают достаточным естественным и искусственным освещением, выделяют при этом:

• зону приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала;
• зону выделения ДНК/РНК в отдельном помещении;
• зону приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР;
• зону детекции продуктов амплификации.

Создаваемая приточно-вытяжная либо вытяжная вентиляция, хоть и допускается установка кондиционеров, предполагает 5-6 м³/час притока воздуха и 6-7 м³/час на вытяжку. При нарушении правил обустройства ПЦР-лаборатории результаты анализа могут быть ложноположительными.

Как правильно подготовиться к анализу?

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР исследований, рекомендуем провести предварительную подготовку к такой диагностике:

1. Перед сдачей слюны необходимо воздержаться от приема пищи, а также лекарств за 4 часа до проведения забора материала. Непосредственно перед самой процедурой необходимо прополоскать рот кипяченой водой. Эти же правила следует соблюдать и при взятии образца для анализа с внутренней поверхности щеки. Проведя полоскания ротовой полости необходимо немного помассировать кожу в области щеки для выделения секрета железы.
2. Моча для анализа обычно собирается в домашних условиях. Правильная подготовка к сдаче ПЦР мочи заключается в следующем — необходимо провести тщательный туалет половых органов, а затем в стерильный пластиковый контейнер собирается 50-60 мл средней порции мочи. Для обеспечения чистоты материала подготовка к анализу ПЦР для женщин предполагает введение тампона во влагалище. Мужчинам следует обязательно открыть головку полового члена. Нельзя сдавать материал для ПЦР анализа в период менструальных выделений.
3. Перед сдачей спермы – следует воздержаться от полового акта в течение 3 дней до забора материала. Советуем отказаться от посещения сауны, даже принятия горячей ванны, употребления острой пищи и алкоголя. А за 3 часа до анализа нужно помочиться, чтобы в последующем воздержаться от мочеиспускания.
4. При сдаче урогенитального мазка – женщинам и мужчинам необходим отказ от половой жизни в течение 3 дней.
5. Нельзя проводить ПЦР после антибиотиков — за 2 недели до анализа следует отказаться от приема антибактериальных препаратов.
6. За неделю до анализа — необходимо прекратить использование интимных мазей, гелей, влагалищных свечей и спринцевание. За 3 часа до исследования — воздержаться от мочеиспускания. Во время менструации забор не проводится — спустя 3 дня после прекращения кровяных выделений можно брать урогенитальный мазок для полимеразной цепной реакции.
7. ПЦР во время беременности имеет свои особенности. Поскольку в период вынашивания любая инфекция может причинить вред плоду, особенно вызываемая ИППП, настоятельно рекомендуется на раннем сроке беременности пройти обследование, чтобы установить наличие либо отсутствие патологии, которая может привести к выкидышу, преждевременным родам. Сдается анализ при постановке на учет, при сроке беременности — до 12 недель.

Анализ крови на ПЦР

ПЦР или полимеразная цепная реакция (Рolymerase Сhain Reaction) – это высокоинформативный метод диагностики, предназначенный для выявления генетических отклонений и дифференциации инфекционных заболеваний.

Клинико-лабораторная оценка биоматериала (крови, мочи и т.п.) основана на определении генно-молекулярной структуры возбудителя инфекции, что нивелирует риск ложноположительного результата анализа. За научно-медицинскую ценность метода его разработчик Кэри Мюллис был удостоен Нобелевской премии в 1993 г.

Специфика метода ПЦР крови на инфекции

Анализ крови на ПЦР (PCR) обнаруживает активных инфекционных агентов и неактивных патогенов, погибших под воздействием медицинских препаратов, на любом этапе развития болезни. Такая способность обусловлена выявлением не просто возбудителя инфекции, а его генома:

• ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, паразитов, грибков;
• РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов.

Пробирку с образцом крови, взятой у пациента, размещают в амплификаторе – реакторе, обеспечивающем последовательное нагревание и охлаждение образца. К биоматериалу добавляют реакционную смесь. В амплификаторе производится более 30 циклов смены температурного режима, каждый из которых включает 3 этапа (денатурацию, отжиг праймеров, элонгацию).

В ходе многократной реакции амплификации:

• разрываются водородные цепи макромолекул (ДНК и РНК);
• образуются комплементарные комплексы матрицы с короткими фрагментами РНК и ДНК (праймеры);
• термостойка ДНК-полимераза достраивает матричную цепь, и формирует множественные генетические копии возбудителя.

При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю. Таким образом, молекулярная диагностика решает три задачи одновременно:

• обнаруживает инфекционного агента;
• дифференцирует его принадлежность (вирус, бактерия и т. д) и разновидность;
• определяет дальнейшую тактику лечения и выбор медикаментов (в соответствии с установленным заболеванием).

ПЦР крови применяют для определения вирусов и бактерий либо тяжелых паразитарных внекишечных инвазий. Генная информация является уникальной, поэтому точность исследования ПЦР практически 100%. Рolymerase Сhain Reaction определяет инфекцию даже при отсутствии активности возбудителя и выраженных симптомов болезни.

Области применения анализа

В настоящее время в медицине и криминалистике, а также для клонирования генов и установления родственных связей применяют более десятка разновидностей амплификации. В ежедневной практике кровь на ПЦР назначают медицинские специалисты:

• педиатр;
• гинеколог;
• уролог;
• дерматовенеролог;
• инфекционист;
• фтизиатр;
• пульмонолог.

Генно-молекулярная диагностика успешно применяется в неонатологии. С помощью полимеразной цепной реакции выявляют возможное заражение младенцев внутриутробно и сразу после появления на свет. Для детей с риском инфицирования анализ проводят в первые 48 часов после рождения и повторно в возрасте 3-6 месяцев.

Кроме инфекционных заболеваний, Рolymerase Сhain Reaction помогает диагностировать наследственные аномалии и мутации. В перинатальный период методом ПЦР у будущего малыша можно обнаружить:

• гемофилию – нарушение свертываемости крови;
• болезнь Хантера – патологии обменных процессов;
• мусковидоз – нарушение внешнесекреторной функции желез;
• нервно-мышечную миодистрофию Дюшенна-Беккера;
• первичный иммунодефицит;
• синдром Альпорта – патологию почек.

PCR используют для определения мутантных генов и их РНК-продуктов в диагностике онкологических заболеваний. Высокая чувствительность молекулярного метода обеспечивает выявление онкопатологий в доклинической стадии, когда очаг опухоли не превышает 0,01 см3 в размерах.

Анализ крови на ВПЧ

По обнаруженным онкогенам, биологическим канцерогенам и антионкогенам диагностируют исходную стадию:

• онкогематологических болезней (рака крови и лимфатической системы);
• злокачественных образований молочных желез;
• аденокарциномы толстой кишки;
• меланомы;
• рака ротоглотки;
• наследственных форм рака.

Высокой онкогенностью обладают штаммы 16, 18, 31, 33, 35 ВПЧ (вируса папилломы человека). В 50% случаев вызывают карциному шейки матки у женщин – раковую опухоль эпителиальных клеток. Обнаружение неопластических клеток в доклинической стадии рака значительно повышает шансы на успешное лечение болезни.

Особую ценность ПЦР имеет для Службы крови. Метод позволяет определить заражение гепатитами, ВИЧ, сифилисом в бессимптомный инкубационный период. На этой стадии иммунная система еще не продуцирует антитела к возбудителям, и выявить заболевания с помощью серологических исследований невозможно.

Проверка донорской крови ПЦР предупреждает возможное инфицирование реципиента

Спектр возможностей ПЦР в диагностике инфекций

Анализ полимеразной цепной реакции крови используется для выявления ЗППП (заболеваний, передающихся половым путем) и урогенитальных инфекций, инфекционных болезней легких, печени, пищеварительной системы, так называемых, детских болезней.

Краткий перечень возбудителей и заболеваний, определяемых по крови, мазку и моче

Комплексный анализ на ЗППП носит название «профиль ПЦР-12», по количеству определяемых возбудителей. В профиль входят половые инфекции:

• хламидиоз;
• гонорея;
• трихомониаз;
• сифилис;
• ВИЧ;
• обычный и генитальный герпес;
• цитомегалия и инфекционный мононуклеоз;
• папилломатоз;
• гепатиты В, С.

А также микоплазмоз и уреаплазмоз – не относящиеся к венерическим болезням, но передающиеся при интимной близости. Отдельный анализ крови ПЦР на кандидоз (молочницу) практикуется редко, поскольку заболевание легко выявляется по мазку из влагалища (у мужчин из уретры).

Показания к проведению ПЦР-12

Прямыми показаниями являются симптоматические проявления, характерные для половых инфекций:

• длительная фебрильная (38-39 ℃) температура тела;
• увеличение лимфатических узлов;
• кожная сыпь;
• зудящие высыпания в области наружных половых органов;
• поллакиурия (учащенное мочеиспускание), сопровождающаяся жжением в уретре;
• боли в нижней части живота, иррадиирующие в поясницу;
• диспареуния (болезненные ощущения во время интимной близости и после секса);
• лейкоррея у женщин (неспецифические влагалищные выделения с неприятным запахом) и выделение слизи из уретры у мужчин.

ПЦР-12 рекомендовано пройти при планировании беременности.

Основные симптомы и осложнения половых инфекционных заболеваний

Основные достоинства PCR

Метод полимеразной цепной реакции применяется в совокупности с другими исследованиями или заменяет:

• Микроскопию (обычную и люминесцентную) – изучение крови под микроскопом (люминесцентным микроскопом).
• Бактериологический посев – высаживание биоматериала на питательные для паразитов, бактерий и т. д. среды, и выращивание в лабораторных условиях колоний болезнетворных микроорганизмов.
• Серологические тесты – основаны на выявлении специфических антител (иммуноглобулинов) к антигену (инфекционному агенту): реакция иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других анализов. Прерогативы ПЦР-диагностики:

• Высокая точность типизации возбудителей. Оценка уникальных для каждого микроорганизма фрагментов ДНК и РНК дает возможность распознать конкретный штамм вируса, разновидность паразитов, грибков и бактерий.
• Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Чтобы обнаружить инфекцию, для ПЦР достаточно молекулярного присутствия патогенного микроорганизма.
• Оперативность проведения анализа. В отличие, к примеру, от бакпосева для выполнения которого требуется 7-14 дней, результаты PCR можно получить через 24 часа (в платных диагностических центрах интервал ожидания может быть сокращен до 5-7 часов).
• Универсальность. Диагностические возможности метода в области инфекционных болезней практически не ограничены.
• Комплексность. Одного образца крови достаточно для проведения исследования на несколько патогенных микроорганизмов.
• Специфичность. При проведении ПЦР исключены перекрестные реакции иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами, следовательно, невозможен ложноположительный результат исследования.

О недостатках Рolymerase Сhain Reaction можно говорить в свете высоких требований к оснащению лаборатории и квалификации медицинского персонала. Анализ проводится в условиях абсолютной стерильности, со строгим соблюдением температурного режима. Присутствие посторонних ДНК в воздухе может исказить результаты исследования.

Важно! Некоторые виды инфекционных агентов способны мутировать. Такое явление наблюдается редко, но изменение РНК-штамма может стать причиной ошибочной дифференциации. В остальных случаях ПЦР-диагностика близка к идеальной.

Подготовительные мероприятия обеспечивают максимальную объективность результатов исследования. Правила подготовки к ПЦР анализу крови включают:

• отказ от приема медикаментов за 5-7 дней до сдачи крови;
• ограничение жирной пищи и исключение из рациона спиртных напитков за 2 дня;
• сокращение физической активности накануне забора крови;
• соблюдение режима голодания 8-12 часов (сдавать кровь необходимо натощак).

За час до процедуры рекомендуется отказаться от никотина (не курить). Забор крови производится из вены, в утренние часы. В современных лабораториях, имеющих условия для проведения ПЦР-диагностики, биоматериал берут при помощи стерильных вакутейнеров. Кровь пациента хранится в течение двух недель, что делает возможным проведение дополнительных тестов.

Пример бланка с результатами анализа

О результатах и ценах

Результаты исследования можно получить на следующий день. Количественный показатель, иначе, число полученных копий инфекционного агента, указывается редко. В большинстве случаев пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:

• «обнаружено» или «положительно» — наличие инфекционного заболевания;
• «не обнаружено» или «отрицательно» — отсутствие заражения.

Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации. Исследование относится к средней ценовой категории.

В клиниках Москвы и других крупных городов стоимость определения одного вида инфекции варьируется от 300 до 500 руб. Комплексный анализ ПЦР-12, как правило, обходится дешевле, чем проверка на каждый возбудитель отдельно.

Итоги

Полимеразная цепная реакция (реакция амплификации) – современное клинико-диагностическое исследование крови и других биожидкостей человека. Анализ основан на обнаружении и дифференциации молекулярного фрагмента вируса, бактерии и т. д. для определения инфекции или поврежденного гена для выявления мутаций, анормальных отклонений в развитии, наследственных патологий.

Ключевые преимущества ПЦР перед иными лабораторными тестами:

• диагностика заболеваний в исходном периоде (при отсутствии психосоматических проявлений);
• обнаружение нескольких патогенов, атакующих организм по одному биообразцу;
• чувствительность практически ко всем инфекционным агентам;
• определение начальных (доклинических) форм рака;
• определение генетических патологий во внутриутробном периоде развития ребенка.

Исследование является высокоинформативным, доступным и оперативным по времени выполнения. Результаты можно получить на следующий день после анализа.